마이크로플레이트리더의 원리 및 구조

분광광도계도 마찬가지다! 쉽게 생각하면 96well과 같은 마이크로플레이트를 넣을 수 있냐 없냐로 생각하자!

마이크로플레이트리더 분광광도계는 단백질 정량(protein assay) 측정시에 쓰인다

 

-원리

유기화합물은 특정 발색단을 가지고 있어 특정파장의 빛을 받으면 흡수하는 원리를 이용하여 물질의 정성 분석애 사용된다. 즉 빛을 흡수하게 해놓고 흡수안한 파장측정!~!

 

-구조

• 광원: 빛을 쏘는 부분. Tungsten Halogen과 Xenon Flash가 있다.
• 파장선택기: wavelength selector로 광원에서 오는 빛을 고르거나, 세세하게 나누워 원하는 것만 나가게 하는 방식. filter와 monochromator가 있다
• 시료부: 시료를 넣는 곳. microplate를 넣거나.. 큐벳을 넣거나..
• 검출기: 빛을 검출하는 곳. photodiode(광다이오드)나 PMT가 있다

 

-Tungsten Halogen VS Xenon Flash

Tungsten Halogen	Xenon Flash
320nm ~ 2000 nm 가시광선, 적외선 실험 가능 빛 세기가 일정, 짧은 수명	200nm ~ 1000 nm 자외선 영역 실험 가능 측정할 때마다 켜짐 = 수명이 길다

 

-Monochromator vs Filter

Monochromator	Filter
Monochromator를 통해 다른 파장의 빛을 다른 각도로 분산시켜 광원으로부터 특정한 파장 선택 200nm ~ 1000 nm → flexibility 필터를 추가로 구매할 필요가 없음. Cost-effective	광학 필터를 이용하여 원하는 파장 선택 제한된 특정파장에서 반복적인 실험에 용이 Sensitivity, read speed가 높음

 

-PMT(photomultiplier tube)

• 현존하는 광센서 중 가장 감도가 높은 센서
• 광자 1개가 입사하는 경우라도 검출 가능
• 입사한 빛에 의해 광음극판에서 낮은 에너지를 가진 전자가 방출
• 광전자의 수 = 입사한 빛의 광자수이기때문에 광전자수가 너무 작아 직접적으로 전기적 신호를 감지할 수 없음 → PMT를 통해 신호 증폭
• 다이노드에 충돌한 전자는 외부 전기장에 의해 가속→ 높은 운동에너지를 가짐→ 더 많은 전자를 나오게 만들어 증폭 -> 증폭된 전자는 양극에 닿아 전기 신호로 바뀜

출처:위키백과

 

 

-TRF(time-resolved fluorescence)

Lanthanide 계열 dye를 사용
일반형광측정 시 excitation과 emission이 거의 동시에 발생하여 noise가 생김
Lanthanide 계열 dye는 life time이 길어 noise가 감소된 상태에서 측정이 가능하여 sensitivity가 높음

 

 

 

마이크로플레이트리더, 분광광도계, 단백질 정량 분석