단백질 정량 종류 및 비교

공부는 궁둥이지/아직 못정했어

mingnine 2021. 5. 10. 20:11

	BCA	Biuret	lowry(로우리)	Bradford
원리	Bicinchoninic acid 단백질의 환원 능력을 이용(Cu2+→Cu1+) 562nm	두개이상의 펩티드 결합을 가진 단백질이 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리와 반응하면 자주색을 띠는 착화합물을 생성 540-560nm	folin-ciocalteau시약+단백질→ 청남색 + 단백질의 환원 능력을 이용(Cu2+→Cu1+) 600nm	Coomassi Blue G-250 dye 산성조건에서 붉은색 이었던 dye가 단백질과 결합하고 푸른색으로 바뀜 450nm
장점	알칼리에 안정 반응생성물이 안정 Detergent에 영향을 받지 않음	모든 단백질에 대해 재현성이 좋음	단백질 종류에 따른 편차가 적다 건조된 시료에서도 이용 가능	발색반응 2분내 완료 빠르고간단 감도가 높다
단점	단백질의 아미노산 조성에따라 반응이 상이 환원당 존재시 민감	Proline은 복합체 형성에 참여할 수 없고 구리이온이 환원되기떄문에 감도가 낮음	단백질이 비가역적으로 변성된다 반응속도가 느리다	Detergent에 영향을 받음 단백질 마다 dye와 결합 정도가 다름

*BCA: 환원된 구리는 Bicinchoninic Acid(BCA) 분자 2개와 반응하여 보랏빛의 착물을 형성한다.

참고하기 좋은 자료↓

*Bradford: 단백질의 중성상태를 무너뜨리게 되면서 소수성부위가 노출되고 이는 반데르발스 힘으로 단백질과 결합